प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी और कन्फोकल माइक्रोस्कोपी के बीच अंतर
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप
1। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप पराबैंगनी प्रकाश का उपयोग एक प्रकाश स्रोत के रूप में एक प्रकाश स्रोत के रूप में करता है, जो निरीक्षण किए जा रहे ऑब्जेक्ट को विकिरणित करता है, जिससे यह प्रतिदीप्ति का उत्सर्जन करता है, और फिर माइक्रोस्कोप के तहत ऑब्जेक्ट के आकार और स्थिति का निरीक्षण करता है। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग कोशिकाओं के भीतर पदार्थों के अवशोषण, परिवहन, वितरण और स्थानीयकरण का अध्ययन करने के लिए किया जाता है। कोशिकाओं में कुछ पदार्थ, जैसे कि क्लोरोफिल, पराबैंगनी विकिरण के संपर्क में आने पर फ्लोरेस कर सकते हैं; कुछ ऐसे पदार्थ भी हैं जो स्वयं प्रतिदीप्ति का उत्सर्जन नहीं कर सकते हैं, लेकिन फ्लोरोसेंट रंजक या फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी के साथ दाग और पराबैंगनी प्रकाश के साथ विकिरणित होने पर प्रतिदीप्ति का उत्सर्जन भी कर सकते हैं। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी ऐसे पदार्थों पर गुणात्मक और मात्रात्मक अनुसंधान के लिए उपकरणों में से एक है।
2। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप का सिद्धांत:
(ए) प्रकाश स्रोत: प्रकाश स्रोत विभिन्न तरंग दैर्ध्य (पराबैंगनी से अवरक्त तक) के प्रकाश का उत्सर्जन करता है।
(बी) उत्तेजना फ़िल्टर प्रकाश स्रोत: एक विशिष्ट तरंग दैर्ध्य का प्रकाश संचारित करना जो नमूना में प्रतिदीप्ति का कारण बन सकता है, जबकि प्रकाश को अवरुद्ध करते हुए जो रोमांचक प्रतिदीप्ति के लिए बेकार है।
(C) फ्लोरोसेंट नमूने: आमतौर पर फ्लोरोसेंट पिगमेंट के साथ दाग।
(डी) अवरुद्ध फ़िल्टर: यह चुनिंदा रूप से प्रतिदीप्ति प्रकाश को अवरुद्ध करके प्रतिदीप्ति को प्रसारित करता है जो नमूना द्वारा अवशोषित नहीं होता है, और प्रतिदीप्ति में कुछ तरंग दैर्ध्य भी चुनिंदा रूप से प्रसारित होते हैं। एक माइक्रोस्कोप जो प्रबुद्ध वस्तु को प्रतिदीप्ति बनाने के लिए एक प्रकाश स्रोत के रूप में पराबैंगनी प्रकाश का उपयोग करता है। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप को पहली बार 1931 में बर्लिन, जर्मनी में नॉर और हरस्का द्वारा इकट्ठा किया गया था। यह माइक्रोस्कोप हल्के बीम के बजाय उच्च गति वाले इलेक्ट्रॉन बीम का उपयोग करता है। प्रकाश तरंगों की तुलना में इलेक्ट्रॉन प्रवाह की बहुत कम तरंग दैर्ध्य के कारण, एक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप की आवर्धन 0.2 नैनोमीटर की न्यूनतम रिज़ॉल्यूशन सीमा के साथ 8 0 0000 बार तक पहुंच सकती है। स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप, जिसका उपयोग पहली बार 1963 में किया गया था, लोगों को वस्तुओं की सतह पर छोटी संरचनाओं को देखने की अनुमति देता है।
3। एप्लिकेशन स्कोप: छोटी वस्तुओं की छवियों को बढ़ाने के लिए उपयोग किया जाता है। आम तौर पर जीव विज्ञान, चिकित्सा, सूक्ष्म कणों, आदि की टिप्पणियों के लिए उपयोग किया जाता है।
कन्फोकल माइक्रोस्कोप
1। कन्फोकल माइक्रोस्कोप परावर्तित प्रकाश पथ के लिए एक अर्ध परावर्तक आधा लेंस जोड़ता है, जो अन्य दिशाओं में लेंस के माध्यम से पारित किए गए परावर्तित प्रकाश को विक्षेपित करता है। इसके केंद्र बिंदु पर, फोकल बिंदु पर स्थित एक पिनहोल के साथ एक चकरा है, और बाफ़ल के पीछे एक फोटोमुल्टिप्लियर ट्यूब है। यह कल्पना की जा सकती है कि डिटेक्शन लाइट फोकस से पहले और बाद में परावर्तित प्रकाश को इस कन्फोकल सिस्टम के माध्यम से छोटे छेद पर ध्यान केंद्रित नहीं किया जा सकता है और इसे बाफ़ल द्वारा अवरुद्ध किया जाएगा। तो फोटोमीटर फोकल बिंदु पर परिलक्षित प्रकाश तीव्रता को मापता है।
2। सिद्धांत: पारंपरिक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप फील्ड लाइट स्रोतों का उपयोग करते हैं, और नमूना पर प्रत्येक बिंदु की छवि पड़ोसी बिंदुओं से विवर्तन या बिखरे हुए प्रकाश से प्रभावित होती है; लेजर स्कैनिंग कन्फोकल माइक्रोस्कोप एक पिनहोल को रोशन करने के लिए एक लेजर बीम का उपयोग करता है और नमूना के फोकल विमान पर हर बिंदु को स्कैन करने के लिए एक बिंदु प्रकाश स्रोत बनाता है। नमूना पर प्रबुद्ध बिंदु का पता लगाने वाले पिनहोल पर imaged किया जाता है, और पिनहोल का पता लगाने के बाद, कंप्यूटर मॉनिटर स्क्रीन पर एक फ्लोरेसेंस छवि बनाने के बाद एक Photomultiplier ट्यूब (PMT) या एक कोल्ड कपलिंग डिवाइस (CCCD) द्वारा बिंदु या रेखा द्वारा बिंदु या रेखा से प्राप्त किया जाता है। रोशनी पिनहोल और डिटेक्शन पिनहोल उद्देश्य लेंस के फोकल प्लेन के सापेक्ष संयुग्मित हैं। फोकल प्लेन पर अंक एक साथ रोशनी पिनहोल और उत्सर्जन पिनहोल पर केंद्रित हैं, और फोकल प्लेन के बाहर के बिंदुओं को डिटेक्शन पिनहोल पर नकल नहीं किया जाएगा। परिणामी confocal छवि नमूना का ऑप्टिकल क्रॉस-सेक्शन है, जो सामान्य सूक्ष्मदर्शी में धुंधली छवियों के नुकसान पर काबू पाने के लिए है।
