ट्रांसमिशन प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी और प्रतिबिंब प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के बीच अंतर और फायदे और नुकसान

ट्रांसमिशन प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी और प्रतिबिंब प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के बीच अंतर और फायदे और नुकसान

1. ट्रांसमिशन प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप: प्रतिदीप्ति को उत्तेजित करने के लिए उत्तेजना प्रकाश स्रोत को एक कंडेनसर के माध्यम से नमूना सामग्री के माध्यम से प्रेषित किया जाता है। आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले डार्क फील्ड कंसंट्रेटर, या साधारण कंसंट्रेटर का उपयोग नमूने पर उत्तेजना प्रकाश और साइड लाइट को परिवर्तित करने के लिए परावर्तक को समायोजित करने के लिए किया जा सकता है। यह अपेक्षाकृत पुराने ज़माने का प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी है। इसका लाभ कम आवर्धन पर मजबूत प्रतिदीप्ति है, जबकि इसका नुकसान यह है कि बढ़ते आवर्धन के साथ इसकी प्रतिदीप्ति कमजोर हो जाती है। इसलिए, बड़े नमूना सामग्रियों का अवलोकन करना बेहतर है।

2. फॉलिंग बीम प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी: यह एक नए प्रकार का प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी है जो आधुनिक समय में विकसित हुआ है। पिछले वाले के विपरीत, उत्तेजना प्रकाश वस्तुनिष्ठ लेंस से नमूने की सतह पर गिरता है, प्रतिदीप्ति एकत्र करने के लिए रोशनी कंडेनसर और वस्तुनिष्ठ लेंस के समान वस्तुनिष्ठ लेंस का उपयोग करता है। ऑप्टिकल पथ में एक दोहरे रंग बीम विभाजक को जोड़ने की आवश्यकता है, जो फोटोयूरेनियम के साथ 45 डिग्री का कोण बनाता है। उत्तेजना प्रकाश वस्तुनिष्ठ लेंस में परावर्तित होता है और नमूने पर एकत्रित होता है। नमूने से उत्पन्न प्रतिदीप्ति और उद्देश्य लेंस और कवर ग्लास की सतह से परावर्तित उत्तेजना प्रकाश एक साथ उद्देश्य लेंस में प्रवेश करता है और दोहरे रंग किरण विभाजक पर लौटता है, जिससे उत्तेजना प्रकाश और प्रतिदीप्ति अलग हो जाती है। फिर अवशिष्ट उत्तेजना प्रकाश को अवरोधक फिल्टर द्वारा अवशोषित कर लिया जाता है। यदि उत्तेजना फिल्टर, दोहरे रंग बीम विभाजक और अवरुद्ध फिल्टर के विभिन्न संयोजनों का उपयोग किया जाता है, तो वे विभिन्न फ्लोरोसेंट प्रतिक्रिया उत्पादों की जरूरतों को पूरा कर सकते हैं। इस फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के फायदे समान दृश्य क्षेत्र की रोशनी, स्पष्ट इमेजिंग और उच्च आवर्धन के साथ मजबूत फ्लोरोसेंस हैं।
संचरण प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के फायदे और नुकसान

प्रकाश स्रोत: उच्च दबाव पारा लैंप या हलोजन लैंप।

स्पॉटलाइट दर्पण: उत्तेजना और प्रतिदीप्ति को अलग करने के लिए एक अंधेरे क्षेत्र स्पॉटलाइट का उपयोग करना।

ऑब्जेक्टिव लेंस: किसी भी प्रकार के ऑब्जेक्टिव लेंस का उपयोग किया जा सकता है।

नमूना: पतले नमूने संचरण अवलोकन के लिए अधिक उपयुक्त होते हैं।

लाभ: ① डार्क फील्ड कंडेनसर के उपयोग के कारण, उत्तेजना प्रकाश ऑब्जेक्टिव लेंस में प्रवेश नहीं कर सकता है, जिससे डार्क बैकग्राउंड बनाना और अच्छा कंट्रास्ट प्राप्त करना आसान हो जाता है, और किसी भी ऑब्जेक्टिव लेंस का उपयोग अवलोकन के लिए किया जा सकता है। ② कम आवर्धन उद्देश्य का उपयोग करते समय, यह परावर्तक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप की तुलना में अधिक चमकीला होता है।

नुकसान: स्पॉटलाइट के केंद्र और ऊंचाई को सही ढंग से समायोजित किया जाना चाहिए, अन्यथा एक उज्ज्वल फ्लोरोसेंट छवि प्राप्त नहीं की जा सकती है। डार्क फील्ड स्पॉटलाइट की फोकल लंबाई सीमा के कारण, मोटी ग्लास स्लाइड का उपयोग नहीं किया जा सकता है। देखने के क्षेत्र का रोशनी क्षेत्र बहुत बड़ा नहीं होना चाहिए, अन्यथा इससे फ्लोरोसेंट नमूने का फ्लोरोसेंस रंग फीका पड़ सकता है। मोटे या अपारदर्शी नमूने उपयुक्त नहीं हैं।

परावर्तक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के फायदे और नुकसान
प्रकाश स्रोत: उच्च दबाव पारा लैंप या हलोजन लैंप।

फोकसिंग लेंस: चूंकि ऑब्जेक्टिव लेंस फोकसिंग लेंस के रूप में कार्य करता है, इसलिए फोकसिंग लेंस की कोई आवश्यकता नहीं होती है।

ऑब्जेक्टिव लेंस: उपयोग किया जाने वाला ऑब्जेक्टिव लेंस पर्याप्त पराबैंगनी प्रकाश प्रसारित करने में सक्षम होना चाहिए और स्वयं प्रतिदीप्ति उत्पन्न नहीं करना चाहिए, संख्यात्मक एपर्चर पर कोई सीमा नहीं होनी चाहिए।

नमूना: मोटे और अपारदर्शी दोनों प्रकार के नमूने देखे जा सकते हैं।

लाभ: ① चूंकि ऑब्जेक्टिव लेंस स्पॉटलाइट के रूप में भी कार्य करता है, इसलिए इसे अधिक समायोजन की आवश्यकता नहीं होती है। ② कोलार रोशनी विधि का उपयोग करके, एपर्चर और दृश्य एपर्चर के क्षेत्र के प्रभावों का उपयोग किया जा सकता है। ऑब्जेक्टिव लेंस का संख्यात्मक एपर्चर सीमित नहीं है, और उच्च आवर्धन पर उच्च-रिज़ॉल्यूशन छवियां भी प्राप्त की जा सकती हैं। मोटे या अपारदर्शी नमूने भी प्राप्त किए जा सकते हैं। अवलोकन किया गया है, और मोटी आवरण पर्चियों का भी उपयोग किया जा सकता है। अन्य अवलोकन विधियों को भी परावर्तित प्रतिदीप्ति के साथ जोड़ा जा सकता है, विशेष रूप से चरण अंतर विधि और ट्रांसमिशन अंतर हस्तक्षेप विधि के साथ यह अनावश्यक प्रतिदीप्ति रंग लुप्त होती घटना से बच सकता है।

नुकसान: ग्राउंड आवर्धन उद्देश्य का उपयोग करते समय, छवि अपेक्षाकृत गहरी होती है, इसलिए उच्च संख्यात्मक एपर्चर उद्देश्य का उपयोग किया जाना चाहिए। फ़िल्टर प्रणाली को प्रभावी ढंग से उत्तेजना ल्यूमिनसेंस और प्रतिदीप्ति को अलग करना चाहिए।