प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी और साधारण प्रकाशीय सूक्ष्मदर्शी के बीच अंतर
प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी और साधारण प्रकाशीय सूक्ष्मदर्शी में अंतर, प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी और साधारण प्रकाशीय सूक्ष्मदर्शी में अंतर है, यह नमूने का निरीक्षण करने के लिए साधारण प्रकाश स्रोत की रोशनी के माध्यम से नहीं है, बल्कि एक निश्चित तरंग दैर्ध्य के प्रकाश (आमतौर पर पराबैंगनी, नीला-बैंगनी) का उपयोग है। फ्लोरोसेंट सामग्री के भीतर माइक्रोस्कोप के नीचे नमूने की उत्तेजना, ताकि यह फ्लोरोसेंट प्रकाश उत्सर्जित करे, इसलिए प्रकाश स्रोत में फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप की भूमिका प्रत्यक्ष प्रकाश नहीं है, बल्कि नमूने के भीतर के फ्लोरोसेंस के उत्तेजना के रूप में है। फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप का प्रकाश स्रोत प्रत्यक्ष रोशनी नहीं है, बल्कि नमूने के अंदर फ्लोरोसेंट पदार्थ को उत्तेजित करने के लिए ऊर्जा स्रोत के रूप में है। हम नमूने का निरीक्षण कर सकते हैं इसका कारण प्रकाश स्रोत की रोशनी के कारण नहीं है, बल्कि उत्तेजित प्रकाश ऊर्जा को अवशोषित करने के बाद नमूने में फ्लोरोसेंट पदार्थ द्वारा प्रस्तुत फ्लोरोसेंस घटना है। यह देखा जा सकता है कि प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी की विशेषताएँ मुख्य रूप से यह हैं कि इसका प्रकाश स्रोत बड़ी संख्या में विशिष्ट तरंगदैर्ध्य श्रेणी के उत्तेजना प्रकाश की आपूर्ति कर सकता है, ताकि जांचे गए नमूने के भीतर प्रतिदीप्ति पदार्थ उत्तेजना प्रकाश की आवश्यक तीव्रता प्राप्त कर सकें। साथ ही, प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी में एक संगत फ़िल्टर सिस्टम होना चाहिए। प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी प्रतिदीप्ति ऊतक रसायन विज्ञान के लिए बुनियादी उपकरण है। यह अल्ट्रा-हाई प्रेशर लाइट सोर्स, फ़िल्टर सिस्टम (उत्तेजना और दमन फ़िल्टर प्लेट सहित), ऑप्टिकल सिस्टम और फ़ोटोग्राफ़िक सिस्टम और अन्य प्रमुख घटकों से बना है, जो प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करने के लिए नमूने को उत्तेजित करने के लिए प्रकाश की एक निश्चित तरंगदैर्ध्य का उपयोग है।
1. प्रतिदीप्ति उत्तेजना का तरीका: प्रकाश की तरंग दैर्ध्य सीमा के अनुसार यूवी उत्तेजना विधि (पराबैंगनी रोशनी का उपयोग करके) और बीवी उत्तेजना विधि (नीले बैंगनी प्रकाश का उपयोग करके) दो प्रकार की यूवी उत्तेजना विधि उत्तेजना के लिए पराबैंगनी प्रकाश के पास 400 एनएम से कम है। इस विधि में कोई दृश्यमान उत्तेजना प्रकाश नहीं है, इसलिए मनाया गया प्रतिदीप्ति डाई के अंतर्निहित प्रतिदीप्ति को दर्शाता है, और पृष्ठभूमि ऊतक के स्व-प्रतिदीप्ति से नमूने पर विशिष्ट प्रतिदीप्ति को भेद करना आसान है।
2. बी.वी. उत्तेजना विधि: यह विधि उत्तेजना के लिए पराबैंगनी से नीले प्रकाश तक 404nm, 434nm पर केंद्रित है। यह विधि नमूने को विकिरणित करने के लिए नीली रोशनी का उपयोग करती है, इसलिए प्रतिदीप्ति अवलोकन प्रणाली के कट-ऑफ फ़िल्टर को एक ऐसे फ़िल्टर का उपयोग करना चाहिए जो नीली रोशनी को पूरी तरह से अवरुद्ध कर सके और वांछित हरे और पीले प्रतिदीप्ति को पूरी तरह से पारित कर सके। फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी विधि के लिए फ्लोरोसेंट पिगमेंट। चूंकि उत्तेजना प्रकाश के अधिकतम अवशोषण की तरंग दैर्ध्य और प्रतिदीप्ति के अधिकतम उत्सर्जन की तरंग दैर्ध्य एक दूसरे के करीब हैं, इसलिए बी.वी. उत्तेजना विधि में उपयोग किए जाने वाले फ़िल्टर तेज कट-ऑफ फ़िल्टर होने चाहिए। यह विधि उत्तेजना प्रकाश के रूप में नीली रोशनी का उपयोग करती है, इसलिए फ्लोरोक्रोम की अवशोषण दक्षता अधिक होती है और एक उज्जवल छवि प्राप्त की जा सकती है। नुकसान यह है कि 500 एनएम से नीचे का प्रतिदीप्ति नहीं देखा जा सकता है, और 500 एनएम से ऊपर पूरी छवि पीली दिखाई देती है। फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी विधि में, अधिकांश विशिष्टता का आकलन फ्लोरोक्रोम के अद्वितीय रंग द्वारा किया जाता है, इसलिए ऊपर वर्णित बी.वी. उत्तेजना विधि के नुकसान सूक्ष्म विशिष्टता पर चर्चा करते समय अत्यंत प्रभावशाली होते हैं।
