सूक्ष्मजीवों की संख्या का निर्धारण-सूक्ष्म प्रत्यक्ष गणना विधि!
जीवाणु जनसंख्या वृद्धि कोशिका संख्या में वृद्धि या कोशिकीय पदार्थ में वृद्धि से प्रकट होती है। कोशिकाओं की संख्या निर्धारित करने के तरीकों में प्रत्यक्ष सूक्ष्म गणना, प्लेट गणना, स्पेक्ट्रोफोटोमीटर द्वारा टर्बिडिटी अनुमान, सबसे संभावित संख्या एमपीएन और झिल्ली निस्पंदन (झिल्ली निस्पंदन) आदि शामिल हैं। सेलुलर पदार्थों को मापने के तरीकों में सेल शुष्क वजन का निर्धारण, नाइट्रोजन सामग्री, आरएनए और डीएनए सामग्री जैसे कुछ सेल घटकों का निर्धारण और मेटाबोलाइट उत्पादों का निर्धारण शामिल है। संक्षेप में, माइक्रोबियल विकास को मापने के लिए कई तरीके हैं, जिनमें से प्रत्येक के अपने फायदे और नुकसान हैं। कार्य की विशिष्ट आवश्यकताओं के अनुसार विधि का चयन किया जाना चाहिए। यह प्रयोग मुख्य रूप से माइक्रोस्कोप डायरेक्ट काउंटिंग विधि का परिचय देता है जिसका उपयोग आमतौर पर उत्पादन और वैज्ञानिक अनुसंधान कार्यों में किया जाता है।
1. उद्देश्य आवश्यकताएँ
1. रक्त कोशिका गणना बोर्ड से गणना के सिद्धांत को स्पष्ट करें।
2. रक्त कोशिका गणना बोर्ड का उपयोग करके सूक्ष्मजीवों की गणना करने की विधि में निपुणता प्राप्त करें।
2. मूल सिद्धांत
माइक्रोस्कोप डायरेक्ट काउंटिंग विधि एक सरल, तेज और सहज विधि है जो परीक्षण किए जाने वाले नमूने के निलंबन की एक छोटी मात्रा को एक निर्धारित क्षेत्र और आयतन (जिसे बैक्टीरियोमीटर भी कहा जाता है) के साथ एक विशेष स्लाइड पर रखती है और इसे सीधे माइक्रोस्कोप के नीचे गिनती करती है। तरीके। वर्तमान में, घर और विदेश में आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले बैक्टीरियोमीटर में शामिल हैं: हेमोसाइटोमीटर, पीटरऑफ-हॉसर बैक्टीरियोमीटर और हॉक्सले बैक्टीरियोमीटर, आदि। इन सभी का उपयोग खमीर, बैक्टीरिया, मोल्ड बीजाणुओं और अन्य निलंबनों की गिनती के लिए किया जा सकता है, और बुनियादी सिद्धांत समान हैं। बाद के दो जीवाणु काउंटरों में कवर ग्लास से ढके जाने के बाद कुल मात्रा 0.02 मिमी3 है, और कवर ग्लास और स्लाइड के बीच की दूरी केवल 0.02 मिमी है। इसलिए, तेल विसर्जन उद्देश्य लेंस का उपयोग बैक्टीरिया जैसी छोटी कोशिकाओं का निरीक्षण और पता लगाने के लिए किया जा सकता है। गिनती। इन बैक्टीरियोमीटर का उपयोग करने के अलावा, एक अनुमान विधि भी है जो सीधे माइक्रोस्कोप के नीचे दृश्य क्षेत्र क्षेत्र में स्मीयर क्षेत्र के अनुपात को देखती है। इस विधि का उपयोग आम तौर पर दूध की जीवाणु संबंधी जांच के लिए किया जाता है। माइक्रोस्कोप प्रत्यक्ष गिनती विधि के फायदे यह हैं कि यह सहज, तेज और संचालित करने में आसान है। हालांकि, इस विधि का नुकसान यह है कि मापा परिणाम आमतौर पर मृत बैक्टीरिया और जीवित बैक्टीरिया का योग होता है। वर्तमान में इस कमी को दूर करने के लिए कुछ तरीके हैं, जैसे कि व्यवहार्य बैक्टीरिया को माइक्रोचैम्बर कल्चर (कम समय) में रंगना और केवल व्यवहार्य बैक्टीरिया की गिनती के उद्देश्य को प्राप्त करने के लिए सेल डिवीजन अवरोधकों को जोड़ना।
यह प्रयोग माइक्रोस्कोप के नीचे प्रत्यक्ष गिनती करने के लिए एक उदाहरण के रूप में एक हेमोसाइटोमीटर का उपयोग करता है। अन्य दो बैक्टीरियोमीटर के उपयोग के लिए, कृपया प्रत्येक निर्माता के निर्देशों का संदर्भ लें। हेमोसाइटोमीटर का उपयोग करके माइक्रोस्कोप के नीचे प्रत्यक्ष गिनती एक सामान्य रूप से इस्तेमाल की जाने वाली माइक्रोबियल गणना विधि है। गिनती बोर्ड एक विशेष स्लाइड है जिसमें चार खांचे होते हैं जो तीन प्लेटफ़ॉर्म बनाते हैं; बीच में व्यापक प्लेटफ़ॉर्म को एक छोटे क्षैतिज खांचे द्वारा दो हिस्सों में विभाजित किया गया है, और प्लेटफ़ॉर्म के प्रत्येक तरफ एक ग्रिड ग्रिड है। प्रत्येक वर्ग ग्रिड को नौ बड़े वर्गों में विभाजित किया गया है, और बीच में बड़ा वर्ग गिनती कक्ष है। रक्त कोशिका गिनती बोर्ड की संरचना चित्र {{0}} में दिखाई गई है। गिनती कक्ष के पैमाने के लिए आम तौर पर दो विनिर्देश होते हैं। एक बड़ा वर्ग है जिसे 25 मध्यम वर्गों में विभाजित किया गया है, और प्रत्येक मध्यम वर्ग को 16 छोटे वर्गों में विभाजित किया गया है (चित्र 15-2); दूसरा एक बड़ा वर्ग है। वर्ग ग्रिड को 16 मध्यम वर्गों में विभाजित किया गया है, और प्रत्येक मध्यम वर्ग को 25 छोटे वर्गों में विभाजित किया गया है। हालाँकि, चाहे वह किसी भी प्रकार का काउंटिंग बोर्ड हो, प्रत्येक बड़े वर्ग में 400 छोटे वर्ग होते हैं। प्रत्येक बड़े वर्ग की भुजा की लंबाई lmm है, तो प्रत्येक बड़े वर्ग का क्षेत्रफल lmm2 है। कवर स्लिप को ढकने के बाद, कवर स्लिप और स्लाइड के बीच की ऊँचाई 0.lmm होती है, इसलिए काउंटिंग चैंबर का आयतन 0.lmm3 (एक मिलीलीटर का दस हजारवाँ भाग) होता है। चित्र 15-1 रक्त कोशिका काउंटिंग बोर्ड की संरचना (1) चित्र 15-2 रक्त कोशिका काउंटिंग बोर्ड की संरचना (2) A. सामने का दृश्य; B. अनुदैर्ध्य खंड; बड़ा वर्ग ग्रिड, बीच में बड़ा वर्ग काउंटिंग चैंबर है 1. रक्त कोशिकाएं काउंटिंग बोर्ड; 2. कवर स्लिप; 3. काउंटिंग चैंबर में काउंटिंग करते समय, आमतौर पर पाँच वर्गों में बैक्टीरिया की कुल संख्या गिनें मान लीजिए कि पाँच मध्य वर्गों में बैक्टीरिया की कुल संख्या A है, और बैक्टीरिया के घोल का कमजोर पड़ने का कारक B है। यदि यह 25 मध्य वर्गों वाली एक गिनती की प्लेट है, तो बैक्टीरिया के घोल के 1mL में बैक्टीरिया की कुल संख्या=A/5×25×104× B=50000A·B (टुकड़े) उसी तरह, यदि यह 16 वर्गों वाली एक गिनती की प्लेट है, तो बैक्टीरिया के घोल के 1mL में बैक्टीरिया की कुल संख्या =A/5×16×104×B=32000A·B (टुकड़े),,
