ऊतक ब्लॉकों की मात्रा के संबंध में बायोमाइक्रोस्कोपी
जैविक माइक्रोस्कोपी अब तक, शीत निर्धारण, जमे हुए अल्ट्राथिन खंड और फ्रीज-सुखाने ऊतक और कोशिका एक्स-रे माइक्रोसेक्शन के लिए नियमित तरीके हैं। इस विधि का विवरण इस प्रकार बताया गया है:
कंडेनसर वाले जैविक सूक्ष्मदर्शी के लिए, चमक को मध्यम बनाने के लिए कंडेनसर को ऊपर और नीचे ले जाया जा सकता है, और मध्यम 9बी चमक प्राप्त करने के लिए परिवर्तनीय प्रकाश के एपर्चर को भी बदला जा सकता है। यदि प्रकाश धूप है, तो कंडेनसर को उचित रूप से ऊपर उठाया जा सकता है, और परिवर्तनीय प्रकाश स्रोत के एपर्चर को उचित रूप से बढ़ाया जा सकता है। यदि प्रकाश बहुत तेज़ है, तो कंडेनसर लेंस को उचित रूप से नीचे किया जा सकता है, और प्रतिच्छेदी प्रकाश के एपर्चर को उचित रूप से कम किया जा सकता है। यदि आप इस मामले में अभी भी चकाचौंध महसूस करते हैं, तो आप एक उपयुक्त फ़िल्टर चुन सकते हैं और इसे कंडेनसर के नीचे ब्रैकेट पर रख सकते हैं। यह ओक वह चमक प्राप्त करने में सक्षम होगा जो आपको संतुष्ट करती है। बेशक, कंडेनसर की ऊपरी और निचली स्थिति को समायोजित करने, चर ऑप्टिकल रीडिंग के एपर्चर आकार को समायोजित करने और एक उपयुक्त फ़िल्टर का चयन करने के लिए अनुभव प्राप्त करने के लिए अभ्यास की एक निश्चित अवधि की आवश्यकता होती है।
जैविक माइक्रोस्कोपी में एक बहुत ही महत्वपूर्ण मुद्दा यह है कि कोशिकाओं को नमूना लेने और अलग करने की प्रक्रिया में, फ्रीज-सुखाने और राल एम्बेडिंग (एफडी) के बाद, अल्ट्रा-पतली समुच्चय को फ्रीज करने के बाद, और फ्रीज-सुखाने के बाद, प्रत्येक भाग में 65 तत्वों की सामग्री होती है सावधानी से संभाला जाना चाहिए. विश्लेषण की जाने वाली कोशिकाएँ क्षतिग्रस्त नहीं हो सकतीं। क्योंकि एक्स-रे माइक्रोएनालिसिस में न केवल कई चरण शामिल होते हैं, बल्कि इसकी लागत भी बहुत अधिक होती है। यदि विश्लेषण की गई कोशिकाएं लंबे समय और बहु-चरणीय प्रसंस्करण के बाद क्षतिग्रस्त कोशिकाएं या मृत कोशिकाएं हैं, तो गलत निष्कर्ष निकालना बहुत खेदजनक है। उदाहरण के लिए, कोलेजनेज़ उपचार द्वारा अलग किए गए कार्डियोमायोसाइट्स के दो आकार होते हैं, एक लंबी छड़ के आकार का, और दूसरा गोल होता है। उत्तरार्द्ध मरने वाली कोशिकाएं हैं जो कोशिका अलगाव के दौरान क्षतिग्रस्त हो जाती हैं।
बायोमाइक्रोस्कोपी इन दोनों प्रकार की कोशिकाओं में इलेक्ट्रोलाइट्स की मात्रा और वितरण काफी भिन्न होता है। गोलाकार कार्डियोमायोसाइट्स में Na बहुत अधिक है और K बहुत कम है, और नेमाटोड में ca की सांद्रता बहुत अधिक है। अन्य विश्लेषण विधियों से जांच करने के बाद, यह साबित हुआ कि गोल कोशिकाओं में उच्च Na और निम्न K और माइटोकॉन्ड्रिया में उच्च Ca कोशिका पृथक्करण प्रक्रिया के दौरान कोशिका झिल्ली की क्षति के कारण होता है। कोशिकाओं और ऊतकों की बर्फ-ठंड निर्धारण विधि में आमतौर पर पहले शमन और निर्धारण को अपनाया जाता है, और फिर उन्हें तरल नाइट्रोजन में संग्रहित किया जाता है। संरक्षण के प्रभाव के लिए शमन निर्धारण बहुत महत्वपूर्ण है। जीवित कोशिकाएँ या ताज़ा ऊतक पानी से भरपूर होते हैं। शमन करते समय, कोशिकाओं या ऊतकों के वे हिस्से जो कुचले हुए रेफ्रिजरेंट के सीधे संपर्क में होते हैं (विशेषकर जब तरल नाइट्रोजन से शमन करते हैं) अक्सर पहले जम जाते हैं और स्थिर हो जाते हैं, इस प्रकार एक "शेल" बनता है, जो कोशिकाओं के केंद्रीय भागों में बाधा उत्पन्न करता है। कुचला हुआ और ठंडा किया हुआ। इसलिए, एक्स-लाइन सूक्ष्म-क्षेत्र विश्लेषण करते समय, अक्सर यह पाया जाता है कि बड़ी कोशिकाओं के केंद्र में बर्फ के क्रिस्टल होते हैं। ऐसा होने से रोकने के लिए, तरल नाइट्रोजन से अधिक लेकिन 806c से कम गलनांक वाले पदार्थ को टूटे हुए रेफ्रिजरेंट के रूप में उपयोग किया जाता है। ऐसे कई पदार्थ हैं, लेकिन सबसे सस्ता सांद्रित प्रोपेन (क्वथनांक - 42.120c, गलनांक - 187.10c, आणविक भार 44.1) है, और शीतलन गति सबसे तेज़ है। लेकिन इसका नुकसान यह है कि यह ज्वलनशील होता है।
जैविक माइक्रोस्कोप मांसपेशी फाइबर को एक विशेष रैक पर रख सकता है, ताकि जब मांसपेशी फाइबर संकुचन एक निश्चित चरण तक पहुंच जाए और इसे ठीक करने की आवश्यकता हो, तो इसे बुझाने और ठीक करने के लिए मांसपेशी फाइबर पर तरल प्रोपेन स्प्रे करने के लिए तुरंत नोजल शुरू करें। फिर मांसपेशियों के तंतुओं को फ्रेम सहित बाहर निकाला गया और तरल नाइट्रोजन में डाल दिया गया। यदि रक्त कोशिकाओं या पृथक कोशिकाओं को ठीक कर रहे हैं, तो पहले कम गति पर सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा कोशिकाओं को केंद्रित करें, कोशिकाओं को अच्छी थर्मल चालकता के साथ एक चांदी की शीशी में स्थानांतरित करें, शीशी को तरल प्रोपेन में रखें, और निर्धारण के लिए फ्रीज करें। हॉल प्रयोगशाला में चूहे के अग्न्याशय को ठीक करते समय, दो स्टील ब्लॉकों को तरल हीलियम (या तरल नाइट्रोजन) के साथ पहले से ठंडा किया गया था, और दो तांबे के ब्लॉकों को संदंश के साथ जकड़ दिया गया था और बुझाने और ठीक करने के लिए अग्न्याशय के सामने और पीछे रखा गया था अग्न्याशय. शमन और स्थिरीकरण के बाद लंबे समय तक भंडारण के लिए ऊतकों या कोशिकाओं को तरल नाइट्रोजन में संग्रहित किया जा सकता है।
जैविक माइक्रोस्कोपी सबसे सम्मानित जमे हुए अल्ट्राथिन अनुभाग विधि के अलावा, यहां वैज्ञानिकों द्वारा उपयोग की जाने वाली एक और जमाव तकनीक है। विश्लेषण से पहले इसे स्थिर करने के लिए विश्लेषण किए जाने वाले घटक के साथ तलछट बनाने के लिए एक पदार्थ जोड़ा जाता है, और फिर तलछट का विश्लेषण किया जाता है। उदाहरण के लिए, लोग अक्सर मांसपेशियों की कोशिकाओं में सीए जमा करने के लिए ऑक्सालेट और पाइरोएंटीमोनेट का उपयोग करते हैं। पहला साइटोप्लाज्म में Ca की कम सांद्रता के प्रति पर्याप्त संवेदनशील नहीं है; पाइरोएंटीमोनेट अधिक संवेदनशील है और मस्तिष्क में मुक्त सीए के साथ इलेक्ट्रॉन-सघन जमाव बना सकता है, लेकिन पाइरोएंटीमोनेट सोडियम, मैंगनीज, बेरियम, आयरन के साथ संगत नहीं है। जमाव भी बनते हैं और कम विशिष्ट होते हैं। नमूना तैयार करने की प्रक्रिया साधारण ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप अल्ट्राथिन खंड नमूनों की तैयारी के समान है, अंतर यह है कि 3 प्रतिशत पोटेशियम पाइरोएंटीमोनेट (फॉस्फेट बफर सलाइन, पीएच 7.6) निर्धारण से पहले 6 घंटे के लिए तय किया गया था, और दागदार मांसपेशी अल्ट्राथिन खंडों पर, प्रत्येक सार्कोमियर के बैंड ए और 2 की मध्य रेखाओं में काले जमाव देखे गए, और बिना दाग वाले खंडों का उपयोग एक्स-रे माइक्रोएनालिसिस के लिए किया गया। डायमिनोबेंज़िडाइन टेट्राहाइड्रोक्लोराइड (डीएबी) का उपयोग हीम युक्त पदार्थों आदि को अवक्षेपित करने के लिए किया जाता था। हिस्टोकेमिकल अवक्षेपण प्रतिक्रिया और एक्स-रे सूक्ष्म-विभेदन पुल के संयोजन पर उन प्रयोगशालाओं में विचार किया जा सकता है जिनमें जमे हुए अल्ट्राथिन खंड की स्थिति नहीं होती है। विश्लेषण किए जाने वाले तत्वों की चरम ऊंचाई के अनुसार अर्ध-मात्रात्मक किया जा सकता है
