ऊतक ब्लॉकों के आयतन पर जैविक माइक्रोस्कोपी
बायोमाइक्रोस्कोपी आज तक, ऊतकों और कोशिकाओं के एक्स-रे माइक्रोफील्ड के लिए बर्फ-ठंडा निर्धारण, जमे हुए अल्ट्रा-पतले खंड और जमे हुए शुष्क हेरफेर नियमित तरीके हैं। विधि का विवरण निम्नलिखित बिंदुओं में समझाया गया है:
जैविक सूक्ष्मदर्शी कंडेनसर लेंस वाले माइक्रोस्कोप को मध्यम चमक प्राप्त करने के लिए ऊपर और नीचे ले जाया जा सकता है, या परिवर्तनीय प्रकाश विस्तारक के एपर्चर को मध्यम 9 बी चमक प्राप्त करने के लिए बदला जा सकता है। यदि प्रकाश धूप है, तो स्पॉटिंग स्कोप को उचित रूप से उठाया जा सकता है, और परिवर्तनीय प्रकाश के एपर्चर को उचित रूप से बढ़ाया जा सकता है। यदि प्रकाश बहुत मजबूत है, तो स्पॉटलाइट दर्पण उचित रूप से नीचे हो सकता है, परिवर्तनीय प्रकाश के एपर्चर को उचित कमी के लिए छलांग लगा सकते हैं। यदि इस मामले में अभी भी अंधापन महसूस होता है, तो आप स्पॉटलाइट के नीचे ब्रैकेट में रखे उपयुक्त फ़िल्टर का चयन कर सकते हैं। यह आपको चमक से संतुष्ट करने के लिए प्राप्त किया जा सकता है। बेशक, कंडेनसर लेंस के ऊपरी और निचले पदों के समायोजन में प्रकाश पढ़ने के एपर्चर के आकार और उपयुक्त फिल्टर का चयन भिन्न हो सकता है
जैविक सूक्ष्मदर्शी एक बहुत ही महत्वपूर्ण मुद्दा कोशिकाओं के नमूने और पृथक्करण की प्रक्रिया में है, फ्रीज-ड्रायिंग और रेजिन एम्बेडिंग (एफडी) अल्ट्रा-बुकलेट को फ्रीज करने के बाद, 65 तत्व संरचना सामग्री के प्रत्येक भाग के ठीक चलने के बाद फ्रीज-ड्रायिंग को बहुत सावधानी से संभाला जाना चाहिए, और देखे जाने और विश्लेषण किए जाने वाले कोशिकाओं को नुकसान नहीं पहुंचाना चाहिए। क्योंकि एक्स-रे माइक्रो-एरिया विश्लेषण न केवल बहुत सारे कदम हैं, और लागत बहुत अधिक है, अगर लंबे समय और प्रसंस्करण के कई चरणों के बाद, विश्लेषण की गई कोशिकाएं क्षतिग्रस्त कोशिकाएं या मृत कोशिकाएं हैं, तो गलत निष्कर्ष निकालना बहुत अफसोसजनक है। उदाहरण के लिए, कोलेजनेज उपचार द्वारा अलग किए गए कार्डियोमायोसाइट्स में दो आकृति विज्ञान हैं, एक लंबी छड़ के आकार का है और दूसरा गोल है
बायोमाइक्रोस्कोपी इन दो प्रकार की कोशिकाओं में इलेक्ट्रोलाइट्स की सामग्री और वितरण बहुत अलग है। गोल कार्डियोमायोसाइट्स में Na बहुत अधिक और K बहुत कम था, और माइटोकॉन्ड्रिया में ca की सांद्रता बहुत अधिक थी। अन्य विश्लेषणात्मक तरीकों से जाँच करने के बाद, यह दिखाया गया कि गोल कोशिकाओं में उच्च Na और कम K और माइटोकॉन्ड्रिया में उच्च ca कोशिका पृथक्करण के दौरान कोशिका झिल्ली को हुए नुकसान का परिणाम थे। कोशिकाओं और ऊतकों का ठंडा स्थिरीकरण अक्सर शमन स्थिरीकरण द्वारा किया जाता है, उसके बाद तरल नाइट्रोजन में परिरक्षण किया जाता है। परिरक्षण की प्रभावशीलता के लिए शमन स्थिरीकरण महत्वपूर्ण है। जीवित कोशिकाएँ या ताजे ऊतक पानी से भरपूर होते हैं, जब शमन अक्सर कोशिकाएँ या ऊतक और ठंडा एजेंट (विशेष रूप से तरल नाइट्रोजन शुद्ध ठंड के साथ) पहले फ्रीज-फिक्सेशन के हिस्सों के साथ सीधे संपर्क में आते हैं, इस प्रकार एक "शेल" बनाते हैं, जो कोशिका के केंद्र को ठंडा स्थिरीकरण से रोकता है। परिणामस्वरूप, एक्स-रे माइक्रोसेलुलर विश्लेषण के दौरान अक्सर बड़ी कोशिकाओं के केंद्र में बर्फ के क्रिस्टल पाए जाते हैं। ऐसा होने से रोकने के लिए, तरल नाइट्रोजन से अधिक लेकिन 806c शुष्क से कम गलनांक वाले पदार्थों को शीतलन एजेंट के रूप में उपयोग किया जाता है। ऐसे कई पदार्थ हैं, लेकिन * प्राप्त करना आसान है, सस्ता है सांद्रित प्रोपेन (क्वथनांक 42.120c, गलनांक 187.10c, आणविक भार 44.1), ठंडा करने की दर * तेज़ है। हालाँकि, इसका नुकसान यह है कि यह ज्वलनशील है।
जैविक माइक्रोस्कोप को एक विशेष शेल्फ मांसपेशी फाइबर पर रखा जा सकता है, ताकि मांसपेशी फाइबर संकुचन एक निश्चित समय चरण तक पहुंचने के लिए तय किया जाना चाहिए, तुरंत नोजल शुरू करें, ताकि मांसपेशी फाइबर जेट के लिए तरल प्रोपेन, ताकि ठंड की शमन तय हो। फिर मांसपेशी फाइबर को रैक के साथ बाहर निकाला जाता है और तरल नाइट्रोजन में डाल दिया जाता है। यदि रक्त कोशिकाओं या अलग-थलग कोशिकाओं को ठीक करना है, तो पहले कम गति वाले सेंट्रीफ्यूजेशन से कोशिकाओं को केंद्रित किया जाता है, कोशिकाओं को चांदी की ट्यूब की अच्छी तापीय चालकता में स्थानांतरित किया जाएगा, ट्यूब तरल प्रोपेन शव में ठंड तय की जाएगी। हॉल प्रयोगशाला ने चूहे के अग्न्याशय को ठीक किया, पहले तरल हीलियम (या तरल नाइट्रोजन) के साथ स्टील के दो टुकड़े पूर्व-शीतलन, एक क्लैंप के साथ क्लैंप किए गए तांबे के दो टुकड़ों को अग्न्याशय के सामने और पीछे रखा जाएगा, ताकि ग्रंथि की चाची ठंड निर्धारण को शांत कर सके। ऊतकों या कोशिकाओं को शमन और फिक्सिंग के बाद लंबे समय तक तरल नाइट्रोजन में संग्रहीत किया जा सकता है।
