ऊतक ब्लॉकों के आयतन के संबंध में जैविक सूक्ष्मदर्शी
जैविक माइक्रोस्कोपी अब तक, ऊतकों और कोशिकाओं के एक्स-रे माइक्रो-सेक्शन के लिए कोल्ड फिक्सेशन, फ्रोजन अल्ट्राथिन सेक्शनिंग और फ्रीज-ड्राइंग नियमित तरीके हैं। इस विधि का विवरण निम्नलिखित है:
जैविक सूक्ष्मदर्शी। कंडेनसर वाले सूक्ष्मदर्शी के लिए, मध्यम चमक प्राप्त करने के लिए कंडेनसर को ऊपर और नीचे ले जाया जा सकता है। इसके अलावा, मध्यम 9 बी चमक प्राप्त करने के लिए चर प्रकाश उत्सर्जक डायोड के एपर्चर को बदला जा सकता है। यदि प्रकाश उज्ज्वल है, तो कंडेनसर को उचित रूप से ऊपर उठाया जा सकता है और चर प्रकाश के एपर्चर को उचित रूप से बढ़ाया जा सकता है। यदि प्रकाश बहुत मजबूत है, तो कंडेनसर को उचित रूप से कम किया जा सकता है और क्रॉस-लाइट बीम के एपर्चर को उचित रूप से कम किया जा सकता है। यदि आप इस स्थिति में अभी भी चकाचौंध महसूस करते हैं, तो आप एक उपयुक्त फ़िल्टर चुन सकते हैं और इसे कंडेनसर के नीचे ब्रैकेट पर रख सकते हैं। इस तरह आप वह चमक प्राप्त कर सकते हैं जो आपको संतुष्ट करती है। बेशक, चर एपर्चर आकार को प्राप्त करने और उपयुक्त फ़िल्टर का चयन करने के लिए कंडेनसर की ऊपर और नीचे की स्थिति को समायोजित करने में अनुभव प्राप्त करने के लिए अभ्यास की एक निश्चित अवधि लगती है।
जैविक माइक्रोस्कोपी में एक बहुत ही महत्वपूर्ण मुद्दा यह है कि कोशिकाओं को इकट्ठा करने और अलग करने की प्रक्रिया के दौरान, फ्रीज-ड्रायिंग और राल एम्बेडिंग (एफडी) के बाद, अल्ट्रा-पतली छर्रों को फ्रीज करने के बाद, और फ्रीज-ड्रायिंग के बाद, प्रत्येक भाग की 65 तत्व सामग्री का बहुत सावधानी से विश्लेषण किया जाना चाहिए, और विश्लेषण की जाने वाली कोशिकाओं को बिल्कुल भी नुकसान नहीं पहुंचाना चाहिए। क्योंकि एक्स-रे माइक्रो-एरिया विश्लेषण में न केवल कई कदम शामिल हैं, बल्कि बहुत खर्च भी होता है। यदि लंबे समय और कई चरणों के बाद, विश्लेषण की गई कोशिकाएं क्षतिग्रस्त कोशिकाएं या मृत कोशिकाएं हैं, तो गलत निष्कर्ष निकालना अफ़सोस की बात होगी। उदाहरण के लिए, कोलेजनेज़ उपचार के बाद अलग किए गए कार्डियोमायोसाइट्स के दो आकार होते हैं, एक लंबी छड़ के आकार का होता है और दूसरा गोल होता है। उत्तरार्द्ध मरने वाली कोशिकाएं हैं जो कोशिका अलगाव के दौरान क्षतिग्रस्त हो जाती हैं।
जैविक माइक्रोस्कोपी इन दो प्रकार की कोशिकाओं में इलेक्ट्रोलाइट्स की सामग्री और वितरण बहुत अलग हैं। गोल कार्डियोमायोसाइट्स में Na बहुत अधिक है और K बहुत कम है, और रैखिक शाखाओं में Ca की सांद्रता बहुत अधिक है। अन्य विश्लेषण विधियों से जाँच करने के बाद, यह साबित हुआ कि गोल कोशिकाओं में उच्च Na और कम K और माइटोकॉन्ड्रिया में उच्च ca कोशिका पृथक्करण प्रक्रिया के दौरान कोशिका झिल्ली को हुए नुकसान के कारण थे। कोशिकाओं और ऊतकों की ठंडी स्थिरीकरण विधि अक्सर पहले उन्हें बुझाना और स्थिर करना और फिर उन्हें तरल नाइट्रोजन में संग्रहीत करना है। संरक्षण प्रभाव के लिए शमन और स्थिरीकरण बहुत महत्वपूर्ण हैं। जीवित कोशिकाएँ या ताजे ऊतक पानी से भरपूर होते हैं। शमन करते समय, कोशिकाओं या ऊतकों के हिस्से जो क्रायोजेन के सीधे संपर्क में होते हैं (विशेष रूप से जब तरल नाइट्रोजन से शमन किया जाता है) पहले जमे हुए और स्थिर होते हैं, इस प्रकार एक "शेल" बनता है, जो कोशिकाओं के मध्य भाग को कुचलने और ठंडा करने में बाधा डालता है। इसलिए, एक्स-लाइन माइक्रो-एरिया विश्लेषण करते समय, अक्सर पाया जाता है कि बड़ी कोशिकाओं के केंद्र में बर्फ के क्रिस्टल होते हैं। ऐसा होने से रोकने के लिए, तरल नाइट्रोजन से ज़्यादा गलनांक वाला लेकिन कम सूखापन वाला पदार्थ -806c कुचले हुए रेफ्रिजरेंट के रूप में इस्तेमाल किया जाता है। ऐसे कई पदार्थ हैं, लेकिन सबसे आसान और सस्ता सांद्रित प्रोपेन (क्वथनांक - 42.120c, गलनांक - 187.10c, आणविक भार 44.1) है, और ठंडा होने की दर भी सबसे तेज़ है। लेकिन इसका नुकसान यह है कि यह ज्वलनशील है।
जैविक माइक्रोस्कोप मांसपेशी फाइबर को एक विशेष फ्रेम पर रख सकता है। जब मांसपेशी फाइबर संकुचन एक निश्चित चरण तक पहुँच जाता है और इसे ठीक करने की आवश्यकता होती है, तो इसे बुझाने और ठीक करने के लिए मांसपेशी फाइबर पर तरल प्रोपेन स्प्रे करने के लिए नोजल को तुरंत चालू किया जाता है। फिर फ्रेम के साथ मांसपेशी फाइबर को बाहर निकाला गया और तरल नाइट्रोजन में डाल दिया गया। यदि रक्त कोशिकाएं या अलग की गई कोशिकाएं स्थिर हैं, तो पहले कोशिकाओं को केंद्रित करने के लिए कम गति पर सेंट्रीफ्यूज करें, कोशिकाओं को अच्छी तापीय चालकता वाली एक छोटी चांदी की ट्यूब में स्थानांतरित करें, ट्यूब को तरल प्रोपेन में रखें और इसे स्थिर करने के लिए फ्रीज करें। हॉल प्रयोगशाला में चूहे के अग्न्याशय को ठीक करते समय, पहले दो स्टील ब्लॉकों को तरल हीलियम (या तरल नाइट्रोजन) से ठंडा करें, दो तांबे के ब्लॉकों को संदंश से जकड़ें, और उन्हें अग्न्याशय से पहले और बाद में रखें ताकि गर्भाशय ग्रंथि को बुझाया और ठीक किया जा सके। ऊतकों या कोशिकाओं को बुझाया और स्थिर किया जा सकता है और फिर दीर्घकालिक भंडारण के लिए तरल नाइट्रोजन में स्थानांतरित किया जा सकता है।
