कन्फोकल प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी की मूल संरचना
(1) स्कैनिंग मॉड्यूल
स्कैनिंग मॉड्यूल में मुख्य रूप से एक पिनहोल लाइट बार (ऑप्टिकल स्लाइस की मोटाई को नियंत्रित करना), एक स्पेक्ट्रोस्कोप (तरंग दैर्ध्य के अनुसार प्रकाश प्रसार की दिशा बदलना), एक उत्सर्जन प्रतिदीप्ति कलरमीटर (पता लगाने के लिए एक निश्चित तरंग दैर्ध्य सीमा के भीतर प्रकाश का चयन करना) और एक डिटेक्टर (फोटोमल्टीप्लायर ट्यूब)। फ्लोरोसेंट नमूने में मिश्रित प्रतिदीप्ति स्कैनर में प्रवेश करती है, और डिटेक्शन पिनहोल लाइट बार, स्पेक्ट्रोमीटर और कलरमीटर द्वारा चुने जाने के बाद, इसे विभिन्न मोनोक्रोमैटिक प्रतिदीप्ति में विभाजित किया जाता है, जो विभिन्न प्रतिदीप्ति चैनलों में पता लगाया जाता है और संबंधित कन्फोकल छवियां बनाता है। एक ही समय में, कई समानांतर मोनोक्रोमैटिक प्रतिदीप्ति छवियां और उनकी मिश्रित छवियां कंप्यूटर स्क्रीन पर प्रदर्शित की जा सकती हैं।
(2) प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी प्रणाली
माइक्रोस्कोप एलएससीएम का मुख्य घटक है, जो सिस्टम की इमेजिंग गुणवत्ता से संबंधित है। माइक्रोस्कोप ऑप्टिकल पथ को इमेजिंग गुणवत्ता और माप सटीकता को प्रभावित किए बिना ऑप्टिकल विकल्पों के साथ एक असीम दूर ऑप्टिकल सिस्टम में आसानी से डाला जा सकता है। उद्देश्य एक बड़ा संख्यात्मक एपर्चर फ्लैट फ़ील्ड एपोक्रोमैटिक उद्देश्य होना चाहिए, जो प्रतिदीप्ति अधिग्रहण और स्पष्ट इमेजिंग के लिए फायदेमंद है। ऑब्जेक्टिव लेंस समूह का रूपांतरण, रंग फ़िल्टर समूह का चयन, स्टेज का मूवमेंट समायोजन, और फ़ोकल प्लेन की मेमोरी लॉकिंग सभी को कंप्यूटर द्वारा स्वचालित रूप से नियंत्रित किया जाना चाहिए।
लेजर स्कैनिंग कन्फोकल माइक्रोस्कोपी में उपयोग किया जाने वाला फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप आम तौर पर पारंपरिक फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोप के समान होता है, लेकिन इसकी अपनी विशेषताएं होती हैं: इसे स्कैनर से कनेक्ट करने की आवश्यकता होती है, ताकि लेजर नमूना को विकिरणित करने और बनाने के लिए माइक्रोस्कोप उद्देश्य में प्रवेश कर सके नमूने द्वारा उत्सर्जित प्रतिदीप्ति डिटेक्टर तक पहुँचती है; एक प्रकाश पथ रूपांतरण उपकरण की आवश्यकता होती है, जो पारा लैंप को लेजर में परिवर्तित करता है, और पारा लैंप की प्रकाश तीव्रता को समायोजित किया जा सकता है।
(3) सामान्य लेजर
लेज़र स्कैनिंग कॉन्फ़ोकल माइक्रोस्कोपी में उपयोग किए जाने वाले लेज़र स्रोतों में एकल लेज़र और मल्टी लेज़र सिस्टम शामिल हैं, और आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले लेज़रों में निम्नलिखित तीन प्रकार शामिल हैं:
सेमीकंडक्टर लेजर: 405nm (पराबैंगनी वर्णक्रमीय रेखा के पास)
आर्गन आयन लेजर: 457 एनएम, 477 एनएम, 488 एनएम, 514 एनएम (नीली हरी रोशनी)
हे-ने लेजर: 543 एनएम (हरा प्रकाश हे-ने हरा लेजर) 633 एनएम (लाल प्रकाश हे-ने लाल लेजर)
यूवी लेजर (यूवी लेजर): 351 एनएम, 364 एनएम (यूवी प्रकाश)
(4) सहायक उपकरण
एयर कूल्ड, वॉटर कूल्ड कूलिंग सिस्टम और विनियमित बिजली आपूर्ति।
लेजर स्कैनिंग कन्फोकल माइक्रोस्कोप का मूल कार्य सिद्धांत पहले लेजर से उत्तेजना प्रकाश की एक निश्चित तरंग दैर्ध्य उत्सर्जित करना है। प्रवर्धन के बाद, प्रकाश एक बिंदु प्रकाश स्रोत बनाने के लिए स्कैनर में प्रबुद्ध पिनहोल प्रकाश पट्टी से होकर गुजरता है। वस्तुनिष्ठ लेंस नमूने के फोकल तल पर ध्यान केंद्रित करता है, और नमूने पर संबंधित प्रबुद्ध बिंदु उत्तेजित होते हैं और प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करते हैं। डिटेक्शन होल लाइट बार से गुजरने के बाद, यह डिटेक्टर तक पहुंचता है और कंप्यूटर मॉनिटरिंग स्क्रीन पर इमेज हो जाता है। इस प्रकार, फोकल तल पर नमूने के प्रत्येक बिंदु की प्रतिदीप्ति छवियों द्वारा एक पूर्ण कन्फोकल छवि बनाई जाती है, जिसे लाइट स्लाइस कहा जाता है।
