लेजर स्कैनिंग मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोप में सुधार के लाभ
लेजर स्कैनिंग मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोप ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी का एक महत्वपूर्ण सुधार है, जो मुख्य रूप से जीवित कोशिकाओं, स्थिर कोशिकाओं और ऊतकों की गहरी संरचनाओं का निरीक्षण करने की क्षमता में प्रकट होता है, और स्पष्ट और तेज बहु {{0} परत Z - विमान संरचनाएं, अर्थात् ऑप्टिकल स्लाइस प्राप्त करता है, जिसका उपयोग नमूनों की तीन आयामी ठोस संरचनाओं के निर्माण के लिए किया जा सकता है। कन्फोकल माइक्रोस्कोप एक लेजर प्रकाश स्रोत का उपयोग करता है, जिसे ऑब्जेक्टिव लेंस के पूरे फोकल प्लेन को भरने के लिए विस्तारित किया जाता है, और फिर ऑब्जेक्टिव लेंस के लेंस सिस्टम के माध्यम से नमूने के फोकल प्लेन पर बहुत छोटे बिंदुओं में परिवर्तित किया जाता है। ऑब्जेक्टिव लेंस के संख्यात्मक एपर्चर के अनुसार, उज्ज्वल रोशनी बिंदु का व्यास लगभग 0.25-0.8 μ मीटर है, और गहराई लगभग 0.5-1.5 μ मीटर है। कन्फोकल बिंदु का आकार माइक्रोस्कोप डिजाइन, लेजर तरंग दैर्ध्य, उद्देश्य विशेषताओं, स्कैनिंग इकाई राज्य सेटिंग्स और नमूना गुणों द्वारा निर्धारित किया जाता है। फ़ील्ड माइक्रोस्कोप की रोशनी सीमा और गहराई बड़ी होती है, जबकि कन्फोकल माइक्रोस्कोप की रोशनी फोकल प्लेन पर एक फोकल बिंदु पर केंद्रित होती है। कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी का मूल लाभ यह है कि यह लगभग 0.5 से 1.5 μ मीटर की मोटाई के साथ मोटे फ्लोरोसेंट नमूनों (50 μ मीटर या अधिक तक) पर बारीक ऑप्टिकल सेक्शनिंग कर सकता है। ऑप्टिकल स्लाइस छवियों की श्रृंखला माइक्रोस्कोप के Z-अक्ष स्टेपर मोटर का उपयोग करके नमूने को ऊपर और नीचे ले जाकर प्राप्त की जा सकती है। छवि जानकारी का संग्रह नमूने पर अन्य स्थितियों से उत्सर्जित संकेतों के हस्तक्षेप के बिना, * * विमान के भीतर नियंत्रित किया जाता है। पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति के प्रभाव को हटाने और सिग्नल-टू-शोर अनुपात को बढ़ाने के बाद, पारंपरिक क्षेत्र रोशनी प्रतिदीप्ति छवियों की तुलना में कन्फोकल छवियों के कंट्रास्ट और रिज़ॉल्यूशन में काफी सुधार हुआ है। कई नमूनों में, जटिल संरचनात्मक घटक आपस में जुड़कर जटिल सिस्टम बनाते हैं, लेकिन एक बार जब पर्याप्त ऑप्टिकल अनुभाग एकत्र किए जा सकते हैं, तो हम उन्हें तीन आयामों में फिर से बनाने के लिए सॉफ्टवेयर का उपयोग कर सकते हैं। कोशिकाओं या ऊतकों के बीच जटिल संरचनात्मक और कार्यात्मक संबंधों को स्पष्ट करने के लिए जैविक अनुसंधान में इस प्रयोगात्मक विधि का व्यापक रूप से उपयोग किया गया है।
